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體外血栓形成：

使用健康普通級新西蘭兔，根據(jù)試驗用血量進(jìn)行心臟采血。采血后即向陰性對照管加入血液，每管加入1.8mL，再加入0.2mL3.2%檸檬酸鈉溶液，混勻備用。剩余的血液按25:1的比例加入3.2%檸檬酸鈉溶液進(jìn)行部分抗凝，混勻后向供試品管、參照品管和空白對照管交叉加入2ml部分抗凝血液，使材料全部被血液浸沒，室溫靜止5～20min，期間觀察供試品管、參照品管和空白對照管中血液的變化，待供試品管、參照品管或空白對照管內(nèi)形成部分血栓時，即向供試品管、參照品管和空白對照管交叉加入0.1%肝素鈉溶液200μL，混勻。室溫靜止10～15min后，將供試品管、參照品管、空白對照管和陰性對照管中的血液取出，置于冷凍離心機(jī)中，在4℃，2000g離心力條件下離心5min，取各管血漿用全自動凝血分析儀測定Fib含量。（注：Fib含量越低，說明血栓形成的量越多。）離心取血漿后，觀察各管血栓形成的情況。

凝血酶原時間：

1、新鮮抗凝兔血制備：使用健康普通級新西蘭兔，根據(jù)試驗用血量進(jìn)行心臟采血，按9:1的比例加入3.2%枸櫞酸鈉溶液進(jìn)行抗凝，混勻，制備成新鮮抗凝兔血。

2、 向供試品管、參照品管和空白對照管中分別加入2.0mL新鮮抗凝兔血，使材料全部被血液浸沒，混勻后放入臺式恒溫?fù)u床中，在（37±1）℃條件下，60r/min動態(tài)接觸15min。15min后取出所有試管，混勻后分離到新的聚丙烯塑料管，置于離心機(jī)中， 2000g離心5min，分離出血漿，取血漿用全自動凝血分析儀測定其PT值。

部分凝血激活酶時間：

1、貧血小板血漿（PPP）制備：使用健康普通級新西蘭兔進(jìn)行心臟采血，按9:1的比例加入3.2%檸檬酸鈉溶液進(jìn)行抗凝，充分混勻，制備成普通級新西蘭兔新鮮抗凝全血，將抗凝全血以 2000g離心5min，分離出PPP。

2、將供試品管、參照品管、陽性對照管和空白對照管中分別加入2mL的PPP，使材料完全被浸沒，混勻后放入臺式恒溫?fù)u床中，在（37±1）℃條件下，60r/min動態(tài)接觸15min。15min后從管中分離出血漿，用全自動血凝分析儀分別測定各管PTT值。

血小板粘附

1、新鮮抗凝兔血：使用健康普通級新西蘭兔，用含EDTA-K2抗凝劑的采血管根據(jù)試驗用血量進(jìn)行心臟采血，混勻，制備成新鮮抗凝兔血。

2、取1g直徑1mm的玻璃珠，填入一根直徑3mm、長120mm的聚四氟乙烯管中，兩端分別用直徑3mm、長20mm硅橡膠管嵌接。在嵌接處用直徑2mm、長2mm的聚四氟乙烯管與一層尼龍網(wǎng)（160目）于聚、硅兩管之間，以防玻璃珠漏出。制備3個玻璃珠柱為空白對照組；將玻璃珠涂以2%甲基硅油，按空白對照制備方法一致制備3個涂硅玻璃珠柱，作為陰性對照組。將供試品按0.2g/mL的比例，制成供試品溶液注入玻璃珠柱內(nèi)，充滿后驅(qū)出多余溶液，反復(fù)2次，經(jīng)干燥后制備3個柱，作為供試品組。

3、取新鮮抗凝兔血0.5ml各3次，接著將血液以0.5ml/15s的速率通過各柱，分別對未通過及已通過玻璃珠柱的血液做血小板計數(shù)。

血小板計數(shù)

1、新鮮兔血制備：使用健康普通級新西蘭兔，根據(jù)試驗用血量進(jìn)行心臟采血，用EDTA-K2進(jìn)行抗凝，充分混勻后待用；

2、向供試品管、參照品管和空白對照管分別加入2mL 新鮮兔血，使材料全部浸沒，充分混勻后放入臺式恒溫?fù)u床上，在（37±1）℃條件下，60r/min動態(tài)接觸15min。15min后取出所有試管，充分混勻，分離管中血液到新的聚丙烯塑料管，在全自動五分類血細(xì)胞分析儀上測定血小板數(shù)量。

白細(xì)胞計數(shù)

1、新鮮兔血制備：使用健康普通級新西蘭兔，根據(jù)試驗用血量進(jìn)行心臟采血，用EDTA-K2進(jìn)行抗凝，充分混勻后待用。

2、向供試品管、參照品管和空白對照管分別加入2mL新鮮抗凝兔血，使材料全部被血液浸沒，混勻后放入臺式恒溫?fù)u床上，在（37±1）℃條件下，60r/min動態(tài)接觸15min 。15min后取出供試品管、參照品管和空白對照管，混勻，分離供試品管、參照品管和空白對照管中的血液到新的聚丙烯塑料管，最后用顯微鏡觀察供試品管、參照品管和空白對照管分離后管中血液的白細(xì)胞形態(tài)，用全自動血細(xì)胞分析儀檢測供試品管、參照品管和空白對照管分離后管中血液的白細(xì)胞數(shù)量。

溶血實驗

1、供試品組每管加入供試品5g，再加入氯化鈉注射液10mL；陰性對照組每管加入氯化鈉注射液10mL；陽性對照組每管加入蒸餾水10mL。每組平行操作3管。

2、全部試管放入恒溫水浴中（37±1）℃保溫30min后，每支試管加入0.2ml.稀釋兔血，輕輕混勻，置（37±1）℃水浴中繼續(xù)保溫60min。倒出管內(nèi)液體以800g離心5min。

3、吸取上清液移入比色皿內(nèi)，用分光光度計在545nm波長處測定吸光度。

補體激活試驗

1、新鮮兔血清：使用健康普通級新西蘭兔，根據(jù)試驗用血量進(jìn)行心臟采血，置于聚丙烯管中，室溫血液自然凝固后置于離心機(jī)中，2000g離心5min，分離血清備用。

向供試品管、參照品管和空白對照管中分別加入2mL新鮮兔血清，然后將其放入恒溫水浴鍋中，在（37±1）℃條件下孵育60min，取出各組試管并置于冰浴中以阻止補體的進(jìn)一步活化，然后將各管中的血清分離至新的聚丙烯管中，按照兔C3a酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒的說明書進(jìn)行操作，使用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定各孔吸光度值，根據(jù)吸光度值計算出供試品組、參照品組和空白對照組C3a的含量。